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深入了解下內(nèi)酰胺酶檢測的具體原理

更新時間:2021-03-16      瀏覽次數(shù):2435
        內(nèi)酰胺酶檢測具有高通量、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn),由于采用分體拼裝設(shè)置,攜帶方便,檢測時可根據(jù)檢測項(xiàng)目可靈活調(diào)整檢測孔的數(shù)量,測試結(jié)果直觀準(zhǔn)確,從而大大的提高了工作效率,同時也節(jié)約了檢測成本。
  內(nèi)酰胺酶檢測的實(shí)驗(yàn)原理:
  酸測量法:青霉素被β-內(nèi)酶胺酶水解后成青霉素酸,pH值下降到6.8以下,用酚紅指示劑,由紅(紫)色 (原液:枸櫞酸緩沖液pH8.5) →黃色(pH6.8以下);淀粉-碘測定法:β內(nèi)酰胺酶破壞β內(nèi)酰胺環(huán),碘與被打開β內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)合,使藍(lán)色的淀粉-碘復(fù)合物轉(zhuǎn)變成無色。β-內(nèi)酰胺酶是多種不同類型以β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物為底物的降解酶,通過水解β-內(nèi)酰胺環(huán)造成β-內(nèi)酰胺類藥物失去活性,將待測菌與頭孢硝噻吩作用一定時間后,如待測菌產(chǎn)生青霉素酶,則可水解頭孢硝噻吩的β-內(nèi)酰胺環(huán),顏色由黃色變?yōu)榧t色。
  內(nèi)酰胺酶檢測的臨床意義:
  1.細(xì)菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶可使易感抗生素水解而滅活。
  2.對革蘭陰性菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定的廣譜青霉素和二、三代頭孢菌素,其耐藥機(jī)制不是由于抗生素被β-內(nèi)酰胺酶水解,而是由于抗生素與大量的β-內(nèi)酰胺酶結(jié)合,使其停留于胞膜外間隙中,不能進(jìn)入靶位發(fā)生抗菌作用。
  3.青霉素結(jié)合蛋白(PBPs)靶蛋白與抗生素親和力降低,PBPs增多或產(chǎn)生新的PBPs均可使抗菌藥物失去抗菌作用。
  4.細(xì)菌的細(xì)胞壁或外膜的通透性改變,使抗生素不能或很少進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)到達(dá)作用靶位,革蘭陰性菌的外膜是限制β-內(nèi)酰胺類抗生素透入菌體的一道屏障。銅綠假單胞菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性是由于外膜非特異性孔道蛋白缺陷所致的。
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